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大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒

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产品名称: 大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒
产品型号:
产品展商: EK-Bioscience
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简单介绍

上海继和生物科技有限公司具备优良的科研队伍、先进的实验设备、准确可靠的实验结果,是广大科研学者*为理想的选择! 购买大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒提供免费代测、技术指导、全方位售后服务,欢迎来电咨询 ,大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒经济、实惠、可靠、完善、稳定。


大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒  的详细介绍

【产品名称】: 大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒  

【适用物种】:Mouse(大鼠)

【检测样本】; 大鼠组织、血清、血浆、及相关液体样本

【检测 方法】:酶联**吸附法(ELISA)

【品 牌】 : Ek-Bioscience/进口品牌:EB、IBL、RD

【规 格】 : 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)

【价 格】 :以询价

【产 地】 :国产/进口

【说明书】 :请通过QQ或电话向咱公司销售免费索要,将竭诚为您服务。


【基本原理】: 

大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒检测的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其**学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其**学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了**反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。


【实验准备】: 

1. 大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒及待测样本

2. 酶标仪(450nm波长滤光片)

3. 高精度移液器,EP管及一次性吸头

4. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水

5. 吸水纸


【标本要求】: 

1.血清:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2.血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

3.尿液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4.细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

5.培养细胞:

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

6.组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


【试剂盒组成】: 

96T/Kit (8*12 strips)

30倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶

酶标包被板 12孔× 8 条

酶标试剂 6ml× 1 瓶

样品稀释液 6ml× 1 瓶

显色剂A 液 6ml× 1 瓶

显色剂B 液 6ml× 1/ 瓶

终止液 6ml× 1 瓶

标准品 0.5ml× 1 瓶

标准品稀释液 1.5ml× 1 瓶

说明书 1份

封板膜 2片(96 )

密封袋 1个


48T/Kit (8*6 strips)

20倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶

酶标包被板 12孔×4条

酶标试剂 3ml×1 瓶

样品稀释液 3ml×1 瓶

显色剂A 液 3ml×1 瓶

显色剂B 液 3ml×1/ 瓶

终止液 3ml×1 瓶

标准品 0.5ml× 1 瓶

标准品稀释液 1.5ml× 1 瓶

说明书 1份

封板膜 2片(48)

密封袋 1个


【操作步骤】:

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,依次进行稀释数倍。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30倍(48T 的20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


【计算结果】:  

大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。


【注意事项】: 

1.大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,*好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。


【操作事项】: 

1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,**个孔与*后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)*好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响*后的酶标仪读数。

5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请**配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请*后乘以稀释倍数。


【洗板方法】: 

1. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。

2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。


【特别说明】:

*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)

#: 一周内使用可存于4℃,需长时间存放或多次使用建议存于-20℃,有效期6个月.


【Ek-Bioscience试剂盒特点体现】:

1、高效、灵敏、特异的抗体;

2、稳定的重复性和可靠性;

3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;

4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;

5、节省实验经费。

大鼠α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)ELISA试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%。


【Ek-Bioscience试剂盒适用范围】:

1.适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;

2.可检测动物类型丰富:人、猴、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡、虾、鱼等

3.可检测指标齐全:白介素,干扰素,血管紧张素,肺炎衣原体,趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、炎症因子、血管生成素 等等 指标

【Ek-Bioscience免费代测服务】: 

1.每个指标需提供100微升样品,如做复孔则200微升

2.标本离心处理后可通知我们工作人员上门取样(**本市),外省可通过泡沫箱加干冰或者冰袋寄送我司。


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